ANÁLISE DE SEQUÊNCIAS MULTILOCUS (MLSA) COMO FERRAMENTA AUXILIAR PARA A CLASSIFICAÇÃO DE ESPÉCIES PATOGÊNICAS EMERGENTES DO GÊNERO Corynebacterium

Espécies não diftéricas do gênero Corynebacterium têm emergido como patógenos oportunistas, estando amplamente distribuídos no meio ambiente. A identificação destes patógenos é um desafio e está se tornando cada vez mais difícil distingui-las com base em seus perfis bioquímicos, pois são necessários diversos testes bioquímicos que não estão disponíveis no Api Coryne, um sistema padronizado para a identificação de bactérias corineformes. Os métodos moleculares apresentam valor complementar, porém não são práticos para uso rotineiro nos laboratórios, e há relatos que espécies intimamente relacionadas não podem ser adequadamente diferenciadas pelas técnicas moleculares. Buscando uma melhor resolução entre as espécies dentro de um gênero, a Análise de Sequências Multilocus (MLSA) é utilizada para este fim. Nesse contexto, utilizamos a MLSA como ferramenta auxiliar para a classificação de espécies patogênicas emergentes do gênero Corynebacterium usando um conjunto de genes codificadores de proteínas presentes nos isolados medicamente relevantes. Os alinhamentos foram editados manualmente, permitinfo uma melhor análise das sequências. Ao identificar sequências com baixa similaridade, utilizamos uma ferramenta on-line que analisa os arquivos de sequenciamento de forma rápida e com baixas taxas de erro. Isso permitiu a confirmação de uma identificação errada para o isolado C. xerosis BMi9815. Foi realizada uma pré-análise para uma avaliação das árvores baseadas em genes individuais, gerando 11 árvores que foram analisadas individualmente buscando inconsistências entre os ramos, observando os agrupamentos estre as espécies que já são conhecidas por serem bem definidas e os agrupamentos entre espécies diferentes.  Em um alinhamento final foram concatenados 8 genes (total de 10.608 pb) obtidos de cada uma das 47 sequências genômicas completas, para posterior realização da análise filogenética por máxima verossimilhança utilizando o Smart Model Selection, e uma análise de split decomposition e construção de SplitsTree..  As nossas análises também permitiram observar 2 clados bem definidos que incluem linhagens de C. minutissimum e C. aurimucosum apoiando a hipótese de que essas espécies não são bem definidas taxonomicamente. Os resultados permitem sugerir a necessidade de uma melhor definição dessas espécies pelos métodos taxonômicos clássicos associados a esses novos métodos moleculares, bem como uma reclassificação de ambas espécies e, potencialmente, descrever novas espécies.